今天給各位小伙伴們講講該如何有效的提高理論塔板數(shù)。理論塔板數(shù)也稱為柱效,是色譜分析中的一個(gè)重要參數(shù)。各位小伙伴經(jīng)常會(huì)看到藥典中規(guī)定理論塔板數(shù)不低于某一個(gè)數(shù)值,因?yàn)橐坏┥V柱理論塔板數(shù)低于該數(shù)值,就會(huì)出現(xiàn)分離度或者拖尾因子達(dá)不到要求的情況,所以理論塔板數(shù)是我們衡量色譜柱是否還能用于該項(xiàng)目的一個(gè)很重要的參考依據(jù)。
理論塔板數(shù)是色譜柱性能的主要參數(shù),是表示色譜柱對(duì)樣品的分離能力或是分離效率(簡(jiǎn)稱柱效),常用“N”表示。通常N值越大,柱效越高,分離能力越強(qiáng),分離效果就越好。
如果色譜峰形對(duì)稱并符合正態(tài)分布,N可近似表示為:
N取決于色譜柱固定相(填料)的種類、性質(zhì)(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑、流動(dòng)相的種類、流速及測(cè)定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。
理論塔板數(shù)可以定量柱效率,計(jì)算公式如下:
N的大小主要和色譜峰中的兩個(gè)因數(shù)有直接關(guān)系,一是保留時(shí)間(t單位秒(s)),二是色譜峰寬(w單位厘米(cm)),要想提高色譜峰的分離效果,增加理論塔板數(shù),我們只要從這兩個(gè)方面做起就足夠。
延長(zhǎng)樣品保留時(shí)間方法很多:
1.選擇更長(zhǎng)的色譜柱;
2.降低色譜柱溫度;
3.減小流速(這個(gè)盡量不要變,因?yàn)榱魉贉p小,色譜峰寬也會(huì)變寬,同時(shí)檢測(cè)靈敏度也會(huì)降低,這樣可能會(huì)得不償失);
4.適當(dāng)降低流動(dòng)相中有機(jī)相的含量(主要針對(duì)反相色譜)。
減小色譜峰寬的方法也有很多:
1.減小進(jìn)樣量;
2.減小進(jìn)樣器到檢測(cè)池之間管路的死體積,尤其是縮短連接管路;
3.采用超高效液相色譜時(shí),采用縮短保留時(shí)間的方法也能減小色譜峰寬(這樣可能對(duì)增加理論塔板數(shù)并無幫助)。