#1 相對(duì)于氣相色譜，液相的優(yōu)勢(shì)在哪里？

答：液相和氣相相比的優(yōu)勢(shì)有很多，主要在于應(yīng)用范圍更廣。氣相只限于容易氣化的低分子量物質(zhì)的分析測(cè)定，對(duì)象大部分是基礎(chǔ)化工原材料；而任何能溶解于某溶劑的物質(zhì)都能用液相分析，適用對(duì)象是分子量從幾十到幾萬(wàn)的廣大范圍。在制藥、化工、環(huán)保、食品等諸多重要領(lǐng)域，液相都已成為主導(dǎo)的分析工具。也有兩者都能應(yīng)用的交叉情況，但液相的制樣更簡(jiǎn)單。液相色譜的出現(xiàn)克服了氣相色譜不能直接用于難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定及高分子化合物的弱點(diǎn)。

#2 經(jīng)常有客戶(hù)疑惑，柱子是否可以反沖？

什么樣的柱子可以反沖？什么不可以？

反沖后是正著用，還是反著用？

答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱(chēng)的柱子不能反沖，不過(guò)目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見(jiàn)了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。月旭的絕大多數(shù)色譜柱都是可以反沖，并且我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。

#3 有的廠(chǎng)商為避免堵塞，使用了較大孔徑（2～5μm）的前篩板，這種情況反沖會(huì)將填料沖出。那么，在使用說(shuō)明書(shū)中會(huì)說(shuō)明前后篩板的孔徑嗎？

答：如果前后篩板孔徑不對(duì)稱(chēng)，廠(chǎng)商肯定也會(huì)在說(shuō)明書(shū)里特別提到的。月旭科技的色譜柱前后篩板孔徑都是對(duì)稱(chēng)的。

#4 反沖的時(shí)候要接檢測(cè)器嗎？

答：反沖就是將柱子反向連到系統(tǒng)中，理論上接不接檢測(cè)器都可以，不過(guò)，若樣品的確比較臟，污染物比較多的情況，建議不接檢測(cè)器，直接出口端放空接廢液瓶。因?yàn)橛形廴疚餂_出來(lái)，連檢測(cè)器容易造成檢測(cè)器的污染。

#5 用離子交換柱做方法開(kāi)發(fā)的時(shí)候，用乙腈和水作為流動(dòng)相，在調(diào)整梯度的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，剛開(kāi)始用60%乙腈，RT為2.5分鐘，調(diào)到40%乙腈，RT沒(méi)有變化，30%也沒(méi)有變化，一直調(diào)到20%的時(shí)候，RT突然變到了約13分鐘，請(qǐng)問(wèn)這是什么原因？

答：離子交換柱的保留機(jī)理主要是靜電相互作用力，影響因素主要有離子強(qiáng)度和pH，此外還有氫鍵等次級(jí)作用力，甚至分子排阻作用也可能存在，因而離子交換色譜中，保留機(jī)理并非像反相色譜那樣簡(jiǎn)單，更不是單純的跟有機(jī)相的比例呈正相關(guān)，需要考慮是否水相比例增大導(dǎo)致了流動(dòng)相離子強(qiáng)度的改變，或增大了氫鍵作用力等。此外，離子交換色譜柱的基質(zhì)是硅膠還是聚合物也有不同的影響。

#6 對(duì)于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？

答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過(guò)程，色譜柱在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過(guò)程中，有可能出現(xiàn)柱內(nèi)溶劑揮發(fā)的情況，導(dǎo)致填料干掉，鍵合相得不到充分潤(rùn)濕，因此需要活化。月旭色譜柱按照說(shuō)明書(shū)活化方式活化即可。除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，把前面用來(lái)平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測(cè)物對(duì)新柱平衡，目的是：將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

#7 C18柱會(huì)用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，這樣做的目的是什么呢？

答：C18柱會(huì)用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，因?yàn)?，色譜柱到達(dá)用戶(hù)手中時(shí)，時(shí)間長(zhǎng)短不一，在存儲(chǔ)和運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，可能存儲(chǔ)液有些揮發(fā)，低流速的甲醇可以很好的浸潤(rùn)固定相，使鍵合相很好的伸展，用溶劑平衡好系統(tǒng)后，可以采取多次進(jìn)樣或者加大進(jìn)樣量的方式以更快的獲得重現(xiàn)的色譜圖，這樣用樣品將色譜柱中的活性位點(diǎn)飽和，就不會(huì)出現(xiàn)異常色譜現(xiàn)象的情況。

#8 我前幾天剛剛裝上一個(gè)新的C18柱，在進(jìn)樣之前我用100%的甲醇沖了半個(gè)多小時(shí)。剛才看到上面寫(xiě)的要活化什么的？不知道我只沖洗半小時(shí)就開(kāi)始用對(duì)柱子有沒(méi)有影響？對(duì)出峰什么的有沒(méi)有影響呢？

答：首先，若僅僅是新柱活化，建議嚴(yán)格按照廠(chǎng)家色譜柱說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行；其次，樣品老化，不是所有的測(cè)定，都需要對(duì)新柱子用所測(cè)樣品老化。但先按方法程序進(jìn)樣幾針，觀(guān)察到峰面積保留時(shí)間不再有明顯變化，再開(kāi)始正式測(cè)定，這是一個(gè)好習(xí)慣。

#9 測(cè)定多肽，一般采用什么柱子？流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類(lèi)似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？

答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18或C8柱就能測(cè)定，也有用離子交換柱、水性柱和HILIC親水作用柱的。若流動(dòng)相中含有三lv乙酸這類(lèi)酸性添加劑，建議還是使用耐受低pH的色譜柱，如月旭科技Ultimate® LP系列。

#10 氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí)，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？

答：氨基柱測(cè)酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類(lèi)的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5～10倍的柱體積的含0.5～1.0％NH3的乙腈/水(50/50)溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨），之后，再進(jìn)行分析這類(lèi)酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨，如0.05％。