01. 正相硅膠柱一般保存在什么溶劑里面比較合適？

短期和長期都建議保存在正相測定所用的流動相中，一般是正己烷和極少量的異丙醇 (95/5, 99/1, 99.5/0.5均可)。
 

02. 磷酸緩沖鹽損耗色譜柱，為什么？使用磷酸鹽緩沖液與其它緩沖液相比，會使色譜柱壽命縮短多少？

首先需要糾正大家一個誤區(qū)，對色譜柱來說，pH＞6.5并不是大家理解的“中性環(huán)境”。當(dāng)緩沖鹽pH＞6.5時，對硅膠色譜柱來說是偏堿性的環(huán)境，故對硅膠基質(zhì)是有損的。加上磷酸鹽分子小，易進(jìn)到鍵合相內(nèi)部造成鍵合相水解。因此經(jīng)常用磷酸鹽，在其它條件差不多一樣的情況下，色譜柱壽命肯定比不用磷酸緩沖鹽相對短一些。但用磷酸鹽也有其不可取代的優(yōu)點，如性質(zhì)穩(wěn)定，緩沖能力強(qiáng)等。
 

03. 反相離子對色譜法中，離子對是如何起作用的？

首先離子對試劑的解離端和目標(biāo)離子形成離子締合物，降低其極性，這樣就能較好的在色譜柱上保留。再者，根據(jù)疏水效應(yīng)理論，離子對試劑的疏水端是很容易和C18鏈相互作用的，這樣更容易在柱子上保留。所以離子對試劑作用是混合保留機(jī)制，即離子對保留機(jī)制，和樣品與離子對生成緊密的結(jié)合物，離子對試劑掩蔽化合物中的極性基團(tuán)，形成的變相反相保留機(jī)制，兩種作用共同作用。
 

04. 四丁基銨類離子對試劑與烷基磺酸鈉離子對試劑有何不同？為何四丁基銨類離子對試劑對色譜柱壽命影響如此大？

四丁基銨類離子對試劑確實不如烷基磺酸鈉等離子對試劑用得普遍，原因是酸類極性物質(zhì)很容易通過降低pH值的方法提高在反相色譜中的保留能力，降低pH可抑制酸的電離，使酸處于中性狀態(tài)而與疏水碳鏈的作用力增強(qiáng)。而堿類分析物則受硅膠基質(zhì)pH上限的嚴(yán)重影響，流動相pH很難調(diào)到很高，故分析堿性化合物的時候，常采用低pH下加入陽離子對試劑。
實驗表明，四丁基銨類離子對試劑比烷基磺酸鈉等陽離子對試劑更難從填料表面去除，故而色譜柱壽命折損比較嚴(yán)重。
 

05. 同一根色譜柱，做完項目A后再做項目B，為何保留時間會變化？為何峰形會異常？會發(fā)生怎樣的變化？

色譜柱被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，即常說的填料變性后，保留時間提前和滯后的情況都有，具體要看污染物的性質(zhì)，還要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情況，情況比較復(fù)雜，更是很難預(yù)測實驗結(jié)果。平時維護(hù)的時候，注意在測定后將污染物用可以將其溶解的溶劑反沖清洗，就可以減輕或避免這種情況的出現(xiàn)。

06. HPLC進(jìn)行柱前衍生目的是什么？

色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過程中用特殊的化學(xué)試劑（一般稱為衍生化試劑或標(biāo)記試劑），使樣品成分轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的衍生物之后進(jìn)行分離檢測的方法。目的為：1.將紫外-可見強(qiáng)吸收功能基團(tuán)引入被檢測對象，或加入熒光基團(tuán)將其轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌?，以提高檢測靈敏度；2.提高對分析樣品的分離和選擇性。

07. 多個樣品不好分離的時候，該怎么通過選擇合適的柱子來提高分離度？

提高分離度可從三個主要影響因素來考慮，柱效、選擇性和保留因子?？赏ㄟ^減小填料粒徑和增加柱長提高柱效；選擇性和固定相選擇以及pH條件有關(guān)，通過選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提高選擇性；保留因子主要與流動相組成和比例有關(guān)，其次流動相pH和離子強(qiáng)度影響目標(biāo)物存在狀態(tài)，也會影響保留因子。有時候適當(dāng)延長出峰時間增加保留因子，也可提高分離度。
 

08. 苯基柱，氰基柱該什么時候考慮用？

苯基柱用于含苯環(huán)的芳香族化合物的測定時，具有較高的選擇性。CN柱可作為一個保留能力最弱的反相柱使用，也可作為一個活性降低的正相柱使用。
 

09. 同樣類型柱子還有長度，粒徑等差異，這些該怎么去選擇？

長度和粒徑都是用來改變柱效的，選擇原則是夠用就好。當(dāng)待分離物質(zhì)≤5個時，150mm柱長的色譜柱可以滿足大多數(shù)樣品的分離。
 

10. 好奇寶寶提問：普通的C18柱能作為正相色譜柱使用嗎？正相色譜體系中Z常用也最普通的是哪種色譜柱？正相柱在使用過程中與反相柱相比有什么需要注意的地方？

正相色譜分離模式是指固定相的極性比流動相的極性大，反過來，流動相極性大就是反相。C18固定相屬于疏水性相對比較強(qiáng)的，疏水性強(qiáng)就是極性很弱，應(yīng)該找不出極性比它更弱的流動相了。況且色譜柱在使用時，要注意極性固定相盡量避免極性溶劑，非極性固定相盡量避免非極性溶劑，否則可能發(fā)生類似“相似相溶”的作用。

正相體系常見的柱子有：硅膠柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普通的應(yīng)該就是硅膠柱。正相柱和反相柱比，最需要注意的是水分，正相柱對水分非常敏感，流動相中水分含量的些微變化對保留時間影響很大，因此正相柱測定前平衡時間需要幾個小時甚至更長。