高效液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70bar時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應(yīng),不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
高效液相色譜柱的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
如何更好的使用高效液相色譜柱,延長柱壽命?
1、拿到高效液相色譜柱后先閱讀說明書,了解具體性能:耐受溫度、耐受PH等。以及沖洗和保存條件。經(jīng)過柱校測試確認(rèn)本身沒有問題后方可正常使用。
2、樣品充分前處理,確保樣品的潔凈;使用保護(hù)柱或在線過濾器,根據(jù)實(shí)際情況更換保護(hù)柱芯或?yàn)V片。
3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。
4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中如果流動(dòng)相中使用了緩沖鹽,避免出現(xiàn)鹽析。
5、選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞,PH過低共價(jià)鍵斷裂,鍵和相水解;PH過高硅膠溶解。
6、使用過程中,如果壓力升高,或出現(xiàn)污染,選擇適當(dāng)?shù)臈l件沖洗或反沖。