液相色譜是實(shí)驗(yàn)室使用頻率非常高的儀器設(shè)備，在使用過(guò)程中會(huì)有許多小技巧和注意事項(xiàng)，今天小編就跟大家一起扒一扒流動(dòng)相使用的那些事兒。

從上圖我們可以看出來(lái)，流動(dòng)相在整個(gè)液相系統(tǒng)中起著重要的作用，類似我們身體的血液，起著運(yùn)輸?shù)淖饔?，關(guān)于流動(dòng)相那些事兒，我們一起來(lái)看看吧。

一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進(jìn)行試驗(yàn)，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的比例。

每減少10%的有機(jī)溶劑（甲醇或乙腈）的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)較為省力的辦法。調(diào)整的過(guò)程中，注意觀察各個(gè)峰的分離情況。

當(dāng)分離達(dá)到一定合適的程度，應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整幅度，直至各組分的分離情況理想。

采用反相色譜法分離弱酸（3≤pK_a≤7）或弱堿（7≤pK_a≤8）樣品時(shí)，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對(duì)于弱酸，流動(dòng)相的pH值越小，組分的K值越大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pK_a值時(shí)，弱酸主要以分子形式存在；對(duì)弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

鹵代溶劑可能含有微量的酸性雜質(zhì)，能與HPLC系統(tǒng)中的不銹鋼反應(yīng)。鹵代溶劑與水的混合物比較容易分解，不能存放太久。鹵代溶劑(如，CCL₄、CHCL₃等）與各種醚類（如，yi醚、二異丙醚、四氫呋喃等）混合后，可能會(huì)反應(yīng)生成一些對(duì)不銹鋼有較大腐蝕性的產(chǎn)物，這種混合流動(dòng)相應(yīng)盡量不采用，或新鮮配制。此外，鹵代溶劑（如CH₂CL₂）與一些反應(yīng)性有機(jī)溶劑（如乙腈）混合靜置時(shí)，還會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶?？傊?，鹵代溶劑最好新鮮配制使用。如果是和干燥的飽和烷烴混合，則不會(huì)產(chǎn)生類似問(wèn)題。

選擇微孔濾膜時(shí)，首先要考慮化學(xué)兼容性。濾膜是否耐酸、堿、有機(jī)溶劑等。幾種常見濾膜的特性及應(yīng)用如下所示：

特性：親水性、高流速、高通量、低蛋白吸附、低溶出物、耐高壓滅菌。

應(yīng)用：一般試劑，樣品的實(shí)驗(yàn)室過(guò)濾；超純水、食品、飲料等的過(guò)濾；血清樣品的過(guò)濾。

特性：親水性、低吸附能力、低非特異性結(jié)合能力、熱穩(wěn)定性。

應(yīng)用：蛋白質(zhì)和酶過(guò)濾；樣品前處理過(guò)濾中廣泛使用的濾膜之一。

特性：親水性、高流速、由硝酸纖維素和醋酸纖維素混合而成。

應(yīng)用：微生物和顆粒分析；無(wú)菌測(cè)試。

特性：親水性、耐弱酸、高蛋白結(jié)合能力。

應(yīng)用：微生物檢測(cè)與捕獲等；微量元素分析等；醫(yī)學(xué)研究及診斷方面的生物工程，生化分析等。

特性：疏水性、高靈敏度、機(jī)械強(qiáng)度高、蛋白吸附低、具有良好的耐熱性及化學(xué)穩(wěn)定性。

應(yīng)用：氣體及蒸汽過(guò)濾， 高溫液體過(guò)濾，溶劑和化學(xué)原料的凈化過(guò)濾；油類中不溶物的凈化；化學(xué)物質(zhì)的分離和提純。

特性：疏水性、具有廣泛的化學(xué)兼容性、耐溫性好、抗強(qiáng)酸強(qiáng)堿、化學(xué)腐蝕性較強(qiáng)的溶劑及氧化劑。

應(yīng)用：化工、醫(yī)藥、食品、能源等領(lǐng)域，幾乎能過(guò)濾所有的有機(jī)溶液；強(qiáng)酸和強(qiáng)堿的過(guò)濾；高溫液體的過(guò)濾；特殊化學(xué)試劑的過(guò)濾；氣體的澄清過(guò)濾。

特性：親水性、耐溫性能好、強(qiáng)度高、化學(xué)穩(wěn)定性好、耐稀酸稀堿等。

應(yīng)用：樣品的除菌，過(guò)濾；工業(yè)水的過(guò)濾。

特性：耐酸堿、耐磨損、耐沖擊、微孔分布均勻、過(guò)濾面積大、透水性好。

應(yīng)用：在藥品、飲料、日常用水、廢水、空氣過(guò)濾等方面廣泛應(yīng)用。

具體實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)該根據(jù)您的過(guò)濾目的實(shí)驗(yàn)需求來(lái)選擇合適的孔徑的濾膜和濾器。

0.1μm: 能去除樣品中的支原體。

0.2μm：可以去除99.99%的細(xì)菌微生物，達(dá)到GMP或者藥典的除菌要求，還可以去除樣品、流動(dòng)相中極細(xì)微的顆粒。

0.45μm: 能濾除大多數(shù)細(xì)菌微生物，對(duì)常規(guī)樣品、流動(dòng)相等的過(guò)濾，能滿足一般色譜要求。

0.8μm及以上：可以過(guò)濾較大顆粒的雜質(zhì)或者難處理、渾濁樣品的預(yù)處理，經(jīng)預(yù)處理后再選擇相應(yīng)濾膜進(jìn)行過(guò)濾。

對(duì)于水相溶液來(lái)說(shuō)，首要的問(wèn)題是防止污染。對(duì)于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動(dòng)相，常換常新，夏天對(duì)于純水或者純鹽流動(dòng)相可以配置后放入冰箱冷藏，臨時(shí)用放置至室溫。

對(duì)于有機(jī)相溶液，可以不用擔(dān)心細(xì)菌繁殖的問(wèn)題。但是有機(jī)相容易發(fā)生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發(fā)生聚合，瓶子里就會(huì)出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過(guò)程的發(fā)生，裝乙腈時(shí)要用棕色的溶劑瓶，避免陽(yáng)光直射，更換乙腈時(shí)應(yīng)當(dāng)棄去瓶底剩余的溶液。

溶劑瓶里的過(guò)濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進(jìn)入到儀器的流路系統(tǒng)中，它的材質(zhì)通常分為玻璃燒結(jié)石英或不銹鋼，如果不慎堵塞會(huì)造成流動(dòng)相吸液不暢，在管路中造成氣泡，需進(jìn)行清洗，玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質(zhì)的可以直接進(jìn)行超聲清洗。