色譜法中常用定性方法分享(二)
更新時(shí)間:2022-10-18 點(diǎn)擊次數(shù):1031
上一期《色譜法中常用定量方法分享》中小編給大家簡(jiǎn)單介紹了色譜柱法中定量的方法,本期就簡(jiǎn)單給大家介紹一下色譜法中的定性分析。
眾suo周知,色譜定性分析就是要確定各色譜峰所代表的化合物。由于各種物質(zhì)在一定的色譜條件下均有確定的保留值,因此保留值可作為一種定性指標(biāo)。各種色譜定性方法都是基于保留值的。但是不同物質(zhì)在同一色譜條件下,可能具有相似或相同的保留值,即保留值并非專屬的。因此僅根據(jù)保留值對(duì)一個(gè)*未知的樣品定性是困難的。如果在了解樣品的來(lái)源、性質(zhì)、分析目的的基礎(chǔ)上,對(duì)樣品組成作初步的判斷,再結(jié)合下列的方法則可確定色譜峰所代表的化合物。
色譜法中定性方法多種多樣,今天就由小編給大家簡(jiǎn)單分享一下色譜法中常用的幾種定性方法。
利用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)未知化合物定性是較常用的高效液相色譜定性方法。由于每一種化合物在特定的色譜條件下(流動(dòng)相組成、色譜柱和柱溫等相同),其保留值具有特征性,因此,可以利用保留值進(jìn)行定性。如果在相同的色譜條件下,被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致,可以初步認(rèn)為被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。若流動(dòng)相組成經(jīng)多次改變后,被測(cè)化合物的保留值仍與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致,就能進(jìn)一步證實(shí)被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一化合物。
紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性
紫外檢測(cè)器是高效液相色譜中使用zui廣泛的一種檢測(cè)器。全波長(zhǎng)掃描紫外檢測(cè)器可以根據(jù)被檢測(cè)化合物的紫外光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是在色譜圖上某組分的色譜峰出現(xiàn)極大值,即濃度最大時(shí),通過停泵等手段,使組分在檢測(cè)池中滯留,然后對(duì)檢測(cè)池中的組分進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,得到該組分的紫外可見光譜圖,再取可能的標(biāo)準(zhǔn)樣品按同樣方法處理。對(duì)比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標(biāo)準(zhǔn)樣品是否相同。某些有特殊紫外光譜圖的化合物也可以通過對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)譜圖來(lái)識(shí)別。
同一種檢測(cè)器對(duì)不同種類的化合物的響應(yīng)值是不同的,而不同的檢測(cè)器對(duì)同一種化合物的響應(yīng)也是不同的。所以當(dāng)某一被測(cè)化合物同被兩種或兩種以上檢測(cè)器檢測(cè)時(shí),兩檢測(cè)器或幾個(gè)檢測(cè)器對(duì)被測(cè)化合物檢測(cè)靈敏度比值與被測(cè)化合物的性質(zhì)是密切相關(guān)的,可以用來(lái)對(duì)被測(cè)化合物進(jìn)行定性。這是雙檢測(cè)器定性的基本原理。
雙檢測(cè)器體系的聯(lián)接有串聯(lián)聯(lián)接和并聯(lián)聯(lián)接方式。當(dāng)兩種檢測(cè)器中的一種是非破壞型的,可以采用簡(jiǎn)單的串聯(lián)聯(lián)接方式,方法是將非破壞型檢測(cè)器串接在破壞型檢測(cè)器之前。若兩種檢測(cè)器都是破壞型的,需采用并聯(lián)方式聯(lián)接,方法是在色譜柱的出口端連接一個(gè)三通,分別聯(lián)接到兩個(gè)檢測(cè)器上。在高效液相色譜中zui常用于定性分析的雙檢測(cè)體系是紫外檢測(cè)器(UVD)和熒光檢測(cè)器(FLD)。
如果使用半制備或者制備模式,收集HPLC流出液中的部分液體樣品,這樣就能收集到一定量的純凈分析物,用來(lái)做脫機(jī)的結(jié)構(gòu)確定分析實(shí)驗(yàn)。因?yàn)榭捎玫臉悠妨枯^大,因此在線分析的時(shí)間范圍限制就不存在了,脫機(jī)的結(jié)構(gòu)分析常常能為一個(gè)收集到的色譜峰提供確鑿的結(jié)構(gòu)信息。脫機(jī)分析包括傳統(tǒng)的FTR、NMR和質(zhì)譜等分析方法;只要有足夠多的樣品,我們還可以用濕化學(xué)試驗(yàn)、X射線晶體學(xué)或者其他分析技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)脫機(jī)分析。