目標化合物在液相色譜中的保留取決于該物質與流動相和固定相間的作用強度。流動相是整個液相色譜分離過程中的“血液"，它對組分有親和力，并參與固定相對組分的競爭，因此流動相的選擇直接影響組分的分離度。

反相色譜是大多數(shù)樣品分析的shou選分離模式，該模式一般比其他液相色譜模式的普適性更好、更方便、更容易獲得令人滿意的分離效果。在反相色譜中，一般使用非極性/弱極性鍵合固定相色譜柱，如C18柱、苯基柱等。

流動相的選擇通常以水相（包括加入一定量的酸、堿、無機鹽緩沖液等）做基礎溶劑，再加入一定量的能與水互溶的如甲醇（質子給體）、乙腈（質子受體）、四氫呋喃（偶極溶劑）等極性溶劑，其極性及其K值（分配系數(shù)）和分離選擇性有顯著影響。下表列出一些常用溶劑的極性參數(shù)p’。

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